Tha Javascript à comas sa bhrobhsair agad an-dràsta.Nuair a tha javascript à comas, chan obraich cuid de dh’ obair na làraich-lìn seo.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Roinn Saidheans, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Catalonia, an Spàinn * Tha beagan lèirsinn aig na h-ùghdaran seo air an obair seo Co-ionann cùl-fhiosrachadh tabhartais: Tha searbhag hyaluronic (HA) na polysaccharide a tha a’ nochdadh gu nàdarrach air a chleachdadh ann a bhith a ’dèanamh lìonaichean dermal airson adhbharan bòidhchead.Leis gu bheil leth-beatha grunn làithean aige ann am figheagan daonna, tha lìonaichean dermal stèidhichte air HA air an atharrachadh gu ceimigeach gus am beatha anns a’ bhodhaig a leudachadh.Is e an atharrachadh as cumanta ann an lìonaichean malairteach stèidhichte air HA cleachdadh ether diglycidyl 1,4-butanediol (BDDE) mar àidseant tar-cheangail gus na slabhraidhean HA a thar-cheangal.Thathas den bheachd gu bheil BDDE a tha air fhàgail no gun fhreagairt neo-phuinnseanta aig <2 phàirt gach millean (ppm);mar sin, feumar an BDDE a tha air fhàgail anns an lìonadh dermal deireannach a thomhas gus dèanamh cinnteach à sàbhailteachd euslaintich.Stuthan agus modhan: Tha an sgrùdadh seo a’ toirt cunntas air lorg agus comharrachadh fo-thoradh den ath-bhualadh tar-cheangail eadar BDDE agus HA fo chumhachan alcaileach le bhith a’ cothlamadh cromatagrafaidheachd liùlach agus mòr-speactrometry (LC-MS).Toraidhean: Às deidh diofar sgrùdaidhean, chaidh a lorg gun do bhrosnaich na suidheachaidhean alcaileach agus teòthachd àrd a chaidh a chleachdadh gus an hydrogel HA-BDDE a dhì-ghalarachadh cruthachadh an fho-toradh ùr seo, an todhar “coltach ri propylene glycol”.Dhearbh mion-sgrùdadh LC-MS gu bheil an aon tomad monoisotopic aig an fho-thoradh ri BDDE, ùine gleidhidh eadar-dhealaichte (tR), agus modh sùghaidh UV eadar-dhealaichte (λ = 200 nm).Eu-coltach ri BDDE, chaidh fhaicinn ann am mion-sgrùdadh LC-MS gu bheil ìre lorgaidh nas àirde aig an fho-toradh seo aig 200 nm fo na h-aon chumhachan tomhais.Co-dhùnadh: Tha na co-dhùnaidhean sin a’ nochdadh nach eil epoxide ann an structar an todhar ùr seo.Tha an deasbad fosgailte gus measadh a dhèanamh air cunnart an fho-toradh ùr seo a lorgar ann an cinneasachadh HA-BDDE hydrogel (HA dermal filler) airson adhbharan malairteach.Faclan-luirg: searbhag hyaluronic, lìonadh dermal HA, searbhag hyaluronic tar-cheangailte, BDDE, mion-sgrùdadh LC-MS, fo-toradh BDDE.
Is e lìonaichean stèidhichte air searbhag hyaluronic (HA) na lìonaichean dermal as cumanta agus as mòr-chòrdte a thathas a’ cleachdadh airson adhbharan cosmaigeach.1 Is e hydrogel a th’ anns an inneal-lìonaidh dermal seo, mar as trice air a dhèanamh suas de> 95% uisge agus 0.5-3% HA, a bheir structar coltach ri gel dhaibh.Is e polysaccharide a th’ ann an 2 HA agus is e am prìomh phàirt den mhaitris extracellular de dhruim-altachain.Aon de na stuthan.Tha e air a dhèanamh suas de (1,4) - glucuronic acid-β (1,3) -N-acetylglucosamine (GlcNAc) ag ath-aithris aonadan disaccharide ceangailte le bannan glycosidic.Tha am pàtran disaccharide seo mar an ceudna anns a h-uile fàs-bheairt.An coimeas ri cuid de lìonaichean stèidhichte air pròtain (leithid collagen), tha an togalach seo a’ dèanamh HA na mholacile a tha gu math biocompatible.Faodaidh na lìonaichean sin sònrachas sreath aminoideach a thaisbeanadh a dh ’fhaodadh a bhith air aithneachadh le siostam dìon an euslaintich.
Nuair a thèid a chleachdadh mar lìonadh dermal, is e prìomh chuingealachadh HA an tionndadh luath aige taobh a-staigh na figheagan air sgàth gu bheil teaghlach sònraichte de enzyman ris an canar hyaluronidase.Gu ruige seo, chaidh grunn atharrachaidhean ceimigeach ann an structar HA a mhìneachadh gus leth-beatha HA ann am figheagan àrdachadh.3 Bidh a’ mhòr-chuid de na h-atharrachaidhean sin a’ feuchainn ri ruigsinneachd hyaluronidase gu polymers polysaccharide a lughdachadh le bhith a’ tar-cheangal slabhraidhean HA.Mar sin, mar thoradh air cruthachadh dhrochaidean agus na ceanglaichean covalent eadar-mholacileach eadar structar HA agus an àidseant tar-cheangail, bidh an hydrogel HA tar-cheangailte a’ toirt a-mach barrachd thoraidhean truaillidh an-aghaidh enzyme na an HA nàdarra.4-6
Gu ruige seo, tha na riochdairean tar-cheangail ceimigeach a thathas a’ cleachdadh gus HA tar-cheangailte a dhèanamh a’ toirt a-steach methacrylamide, 7 hydrazide, 8 carbodiimide, 9 divinyl sulfone, 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) Agus poly (ethylene glycol) diglycidyl ether.Is e 10 ,11 BDDE an àidseant tar-cheangail as cumanta an-dràsta.Ged a chaidh na seòrsaichean hydrogels seo a dhearbhadh gu bhith sàbhailte airson deicheadan, tha na riochdairean tar-cheangail a thathas a’ cleachdadh nan ath-bheachdan reactive a dh’ fhaodadh a bhith cytotoxic agus, ann an cuid de chùisean, mutagenic.12 Mar sin, feumaidh an susbaint a tha air fhàgail aca anns an hydrogel deireannach a bhith àrd.Thathas den bheachd gu bheil BDDE sàbhailte nuair a tha an dùmhlachd fuigheall nas lugha na 2 phàirt gach millean (ppm).4
Tha grunn dhòighean ann airson dùmhlachd BDDE le fuigheall ìosal a lorg, ceum tar-cheangail agus suidheachadh ionadachaidh ann an hydrogels HA, leithid cromatagrafaidheachd gas, cromatagrafaidheachd às-dùnadh meud còmhla ri mòr-speactrometry (MS), dòighean tomhais fluorescence ath-shuidheachadh magnetach niùclasach (NMR), agus Raon diod ceangailte ri cromatagrafaidheachd liùlach àrd-choileanadh (HPLC).13-17 Tha an sgrùdadh seo a’ toirt cunntas air lorg agus comharrachadh fo-thoradh anns an hydrogel HA tar-cheangailte mu dheireadh a chaidh a thoirt a-mach le freagairt BDDE agus HA fo chumhachan alcaileach.HPLC agus cromatagrafaidheachd lionn-mass spectrometry (mion-sgrùdadh LC-MS).Leis nach eil fios dè cho puinnseanta ‘s a tha an fo-thoradh seo de BDDE, tha sinn a’ moladh gum bu chòir an tomhas fuigheall aige a bhith air a dhearbhadh san aon dòigh ris an dòigh as àbhaist a bhith air a dhèanamh air BDDE san toradh deireannach.
Tha cuideam moileciuil de ~ 1,368,000 Da (modh Laurent) 18 agus slaodachd gnèitheach de 2.20 m3 / kg aig an t-salann sodium a fhuaireadh de HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Iapan).Airson an fhreagairt tar-cheangail, chaidh BDDE (≥95%) a cheannach bho Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).Chaidh saline bufair fosfat le pH 7.4 a cheannach bho Sigma-Aldrich Company.Chaidh a h-uile fuasgladh, acetonitrile agus uisge a chaidh a chleachdadh anns an anailis LC-MS a cheannach bho chàileachd ìre HPLC.Tha searbhag formic (98%) air a cheannach mar ìre reagent.
Chaidh a h-uile deuchainn a dhèanamh air siostam Togail UPLC (Waters, Milford, MA, na SA) agus ceangailte ri mòr-speictriméadar ceithir-cheàrnach trì-fhillte API 3000 uidheamaichte le stòr ionization electrospray (AB SCIEX, Framingham, MA, USA).
Chaidh an synthesis de hydrogels HA tar-cheangailte a thòiseachadh le bhith a’ cur 198 mg de BDDE ri fuasgladh sodium hyaluronate 10% (w / w) an làthair 1% alkali (sodium hydroxide, NaOH).B’ e an dùmhlachd BDDE mu dheireadh anns a’ mheasgachadh ath-bhualadh 9.9 mg / mL (0.049 mM).An uairsin, tha am measgachadh ath-bhualadh air a mheasgachadh gu math agus air a cho-aonachadh agus leig leis a dhol air adhart aig 45 ° C airson 4 uairean.19 Tha pH an ath-bhualadh air a chumail aig ~12.
Às deidh sin, chaidh am measgachadh ath-bhualadh a nighe le uisge, agus chaidh an hydrogel HA-BDDE mu dheireadh a shìoladh agus a lagachadh le bufair PBS gus dùmhlachd HA de 10 gu 25 mg / mL a choileanadh, agus pH deireannach de 7.4.Gus na hydrogels HA tar-cheangailte a chaidh a thoirt a-mach a sterilachadh, tha na hydrogels sin uile air an autoclaved (120 ° C airson 20 mionaid).Tha an hydrogel fìor-ghlan BDDE-HA air a stòradh aig 4 ° C gus an tèid mion-sgrùdadh a dhèanamh.
Gus mion-sgrùdadh a dhèanamh air an BDDE a bha an làthair anns an toradh HA tar-cheangailte, chaidh sampall 240 mg a chuideam agus a thoirt a-steach don toll sa mheadhan (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; tomhas-lìonaidh 0.5 mL) agus centrifuged aig 10,000 rpm aig teòthachd an t-seòmair 10 mionaidean.Chaidh 20 µL de leaghan slaodadh sìos gu h-iomlan a chruinneachadh agus a sgrùdadh.
Gus sgrùdadh a dhèanamh air inbhe BDDE (Sigma-Aldrich Co) fo chumhachan alcaileach (1%, 0.1% agus 0.01% NaOH), ma thèid na cumhaichean a leanas a choileanadh, is e an sampall leaghaidh 1:10, 1:100, no suas ri 1: 1,000,000 Ma tha feum air, cleachd uisge deionized MilliQ airson mion-sgrùdadh.
Airson na stuthan tòiseachaidh a chaidh a chleachdadh san ath-bhualadh tar-cheangail (HA 2%, H2O, 1% NaOH, agus 0.049 mM BDDE), chaidh 1 mL de gach sampall a chaidh ullachadh bho na stuthan sin a sgrùdadh a’ cleachdadh na h-aon shuidheachaidhean sgrùdaidh.
Gus faighinn a-mach dè cho sònraichte ‘s a tha na stùcan a tha a’ nochdadh sa mhapa ion, chaidh 10 µL de fhuasgladh àbhaisteach 100 ppb BDDE (Sigma-Aldrich Co) a chur ris an sampall 20 µL.Anns a ’chùis seo, is e 37 ppb an ìre mu dheireadh den inbhe anns gach sampall.
An toiseach, ullaich fuasgladh stoc BDDE le dùmhlachd de 11,000 mg / L (11,000 ppm) le bhith a’ caolachadh 10 μL de BDDE àbhaisteach (Sigma-Aldrich Co) le uisge 990 μL MilliQ (dùmhlachd 1.1 g / mL).Cleachd am fuasgladh seo gus fuasgladh BDDE 110 µg/L (110 ppb) ullachadh mar lagachadh àbhaisteach eadar-mheadhanach.An uairsin, cleachd an diluent àbhaisteach BDDE eadar-mheadhanach (110 ppb) gus an lùb àbhaisteach ullachadh le bhith a’ caolachadh an caolaiche eadar-mheadhanach grunn thursan gus an dùmhlachd a tha thu ag iarraidh de 75, 50, 25, 10, agus 1 ppb a choileanadh.Mar a chithear ann am Figear 1, thathas a’ faighinn a-mach gu bheil sreathachd math aig an lùb àbhaisteach BDDE bho 1.1 gu 110 ppb (R2> 0.99).Chaidh an lùb àbhaisteach ath-aithris ann an ceithir deuchainnean neo-eisimeileach.
Figear 1 lùb calibration àbhaisteach BDDE air fhaighinn le mion-sgrùdadh LC-MS, anns a bheil co-dhàimh math air fhaicinn (R2> 0.99).
Giorrachaidhean: BDDE, ether diglycidyl 1,4-butanediol;LC-MS, cromatagrafaidheachd liùlach agus mòr-speactrometry.
Gus na h-inbhean BDDE a tha an làthair anns an HA tar-cheangailte agus inbhean BDDE anns an fhuasgladh bunaiteach a chomharrachadh agus a thomhas, chaidh mion-sgrùdadh LC-MS a chleachdadh.
Chaidh an sgaradh cromatagrafach a choileanadh air colbh LUNA 2.5 µm C18 (2) -HST (50 × 2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) agus air a chumail aig teòthachd an t-seòmair (25 ° C) rè an sgrùdaidh.Tha an ìre gluasadach air a dhèanamh suas de acetonitrile (solvent A) agus uisge (solvent B) anns a bheil 0.1% searbhag formic.Tha an ìre gluasadach air a chuir às le elution caisead.Tha an caisead mar a leanas: 0 mionaidean, 2% A;1 mhionaid, 2% A;6 mionaidean, 98% A;7 mionaidean, 98% A;7.1 mionaidean, 2% A;10 mionaidean , 2% A. 'S e 10 mionaidean an ùine ruith agus 's e 20 µL an tomhas-stealladh.Tha ùine gleidhidh BDDE timcheall air 3.48 mionaidean (bho 3.43 gu 4.14 mionaidean stèidhichte air deuchainnean).Chaidh an ìre gluasadach a phumpadh aig ìre sruth de 0.25 mL / min airson mion-sgrùdadh LC-MS.
Airson mion-sgrùdadh agus tomhas BDDE le MS, tha an siostam UPLC (Uisge) air a chur còmhla ri mòr-speictriméadar ceithir-cheàrnach trì-fhillte API 3000 (AB SCIEX) uidheamaichte le stòr ianachaidh electrospray, agus tha an anailis air a dhèanamh ann am modh ian dearbhach (ESI +).
A rèir mion-sgrùdadh criomag ian a chaidh a dhèanamh air BDDE, chaidh a’ chriomag leis an dian as àirde a dhearbhadh mar a’ chriomag a rèir 129.1 Da (Figear 6).Mar sin, anns a’ mhodh sgrùdaidh ioma-ion (MIM) airson àireamhachadh, is e an tionndadh mòr (co-mheas mòr-gu-chosgais [m/z]) de BDDE 203.3/129.1 Da.Bidh e cuideachd a’ cleachdadh modh làn scan (FS) agus modh scan ian toraidh (PIS) airson mion-sgrùdadh LC-MS.
Gus dearbhadh dè cho sònraichte sa tha an dòigh, chaidh sampall bàn (ìre gluasadach tùsail) a sgrùdadh.Cha deach comharra sam bith a lorg anns an sampall bàn le tionndadh mòr de 203.3 / 129.1 Da.A thaobh ath-chomasachd an deuchainn, chaidh mion-sgrùdadh a dhèanamh air 10 in-stealladh àbhaisteach de 55 ppb (ann am meadhan an lùb calibration), a’ leantainn gu claonadh àbhaisteach fuigheall (RSD) <5% (dàta nach eil air a shealltainn).
Chaidh an t-susbaint BDDE a tha air fhàgail a thomhas ann an ochd hydrogels HA tar-cheangailte BDDE fèin-ghluasadach eadar-dhealaichte, a rèir ceithir deuchainnean neo-eisimeileach.Mar a chaidh a mhìneachadh anns an roinn “Stuthan agus Dòighean”, tha an tomhas air a mheasadh a rèir luach cuibheasach lùb ath-thilleadh caolachadh àbhaisteach BDDE, a tha a rèir an stùc shònraichte a chaidh a lorg aig eadar-ghluasad mòr BDDE de 203.3 / 129.1 Da, le gleidheadh ùine de 3.43 gu 4.14 mionaidean Gun a bhith a’ feitheamh.Tha Figear 2 a’ sealltainn eisimpleir de chromatogram den inbhe iomraidh 10 ppb BDDE.Tha Clàr 1 a’ toirt geàrr-chunntas air susbaint BDDE a tha air fhàgail ann an ochd diofar hydrogels.Is e an raon luach 1 gu 2.46 ppb.Mar sin, tha an dùmhlachd BDDE a tha air fhàgail san sampall iomchaidh airson cleachdadh daonna (<2 ppm).
Figear 2 Cromatogram ian de inbhe iomraidh 10 ppb BDDE (Sigma-Aldrich Co), eadar-ghluasad MS (m / z) air fhaighinn le mion-sgrùdadh LC-MS de 203.30 / 129.10 Da (ann am modh adhartach MRM).
Giorrachaidhean: BDDE, ether diglycidyl 1,4-butanediol;LC-MS, cromatagrafaidheachd liùlach agus mòr-speactrometry;MRM, sgrùdadh ioma-fhreagairt;MS, maise ;m/z, co-mheas tomad-gu-charge.
Nota: Tha sampaill 1-8 nan hydrogels HA tar-cheangailte BDDE tar-cheangailte.Thathas cuideachd ag aithris air na tha air fhàgail de BDDE anns an hydrogel agus an ìre as àirde de ùine gleidhidh BDDE.Mu dheireadh, thathas cuideachd ag aithris gu bheil stùcan ùra ann le amannan gleidhidh eadar-dhealaichte.
Giorrachaidhean: BDDE, ether diglycidyl 1,4-butanediol;HA, searbhag hyaluronic;MRM, sgrùdadh ioma-fhreagairt;tR, ùine gleidhidh;LC-MS, cromatagrafaidheachd liùlach agus mòr-speactrometry;RRT, ùine gleidhidh càirdeach.
Gu h-iongantach, sheall an anailis air cromatogram ian LC-MS, stèidhichte air na sampallan hydrogel HA tar-cheangailte fèin-ghluasadach a chaidh an sgrùdadh, gu robh stùc a bharrachd aig an ùine gleidhidh nas giorra de 2.73 gu 3.29 mionaidean.Mar eisimpleir, tha Figear 3 a’ sealltainn cromatogram ian de shampall HA tar-cheangailte, far a bheil stùc a bharrachd a’ nochdadh aig àm gleidhidh eadar-dhealaichte timcheall air 2.71 mionaidean.Chaidh an ùine gleidhidh coimeasach (RRT) a chaidh fhaicinn eadar an stùc a chaidh fhaicinn às ùr agus an ìre as àirde bho BDDE a lorg mar 0.79 (Clàr 1).Leis gu bheil fios againn nach eil an stùc a chaidh fhaicinn às ùr cho glèidhte sa cholbh C18 a chaidh a chleachdadh anns an anailis LC-MS, is dòcha gum bi an stùc ùr a’ freagairt ri todhar nas polar na BDDE.
Figear 3 Cromatogram ian de shampall hydrogel HA tar-cheangailte air fhaighinn le LC-MS (tionndadh mòr MRM 203.3 / 129.0 Da).
Giorrachaidhean: HA, searbhag hyaluronic;LC-MS, cromatagrafaidheachd liùlach agus mòr-speactrometry;MRM, sgrùdadh ioma-fhreagairt;RRT, ùine gleidhidh càirdeach;tR, àm gleidhidh.
Gus cur às don chomas gum faodadh na stùcan ùra a chaidh fhaicinn a bhith nan truailleadh a bha an làthair bho thùs anns na stuthan amh a chaidh a chleachdadh, chaidh na stuthan amh sin a sgrùdadh cuideachd a’ cleachdadh an aon dòigh sgrùdaidh LC-MS.Tha na stuthan tòiseachaidh a chaidh a sgrùdadh a’ toirt a-steach uisge, 2% NaHA ann an uisge, 1% NaOH ann an uisge, agus BDDE aig an aon dùmhlachd a chaidh a chleachdadh san ath-bhualadh tar-cheangail.Cha do sheall cromatogram ian an stuth tòiseachaidh a chaidh a chleachdadh todhar no stùc sam bith, agus tha an ùine gleidhidh aige a rèir an stùc ùr a chaidh fhaicinn.Tha an fhìrinn seo a’ tilgeil air falbh a’ bheachd nach e a-mhàin gu bheil todhar no stuthan anns an stuth tòiseachaidh a dh’ fhaodadh bacadh a chur air a’ mhodh sgrùdaidh, ach nach eil sgeul air tar-thruailleadh a dh’ fhaodadh a bhith ann le toraidhean obair-lann eile.Tha na luachan dùmhlachd a gheibhear às deidh mion-sgrùdadh LC-MS air BDDE agus stùcan ùra air an sealltainn ann an Clàr 2 (sampaill 1-4) agus an cromatogram ian ann am Figear 4.
Nota: Tha sampaill 1-4 a’ freagairt ris na stuthan amh a thathas a’ cleachdadh gus hydrogels HA tar-cheangailte BDDE tar-cheangailte a dhèanamh.Cha deach na sampallan sin a ghluasad gu fèin-ghluasadach.
Giorrachaidhean: BDDE, ether diglycidyl 1,4-butanediol;HA, searbhag hyaluronic;LC-MS, cromatagrafaidheachd liùlach agus mòr-speactrometry;MRM, sgrùdadh ioma-fhreagairt.
Tha Figear 4 a 'freagairt ris a' chromatogram LC-MS de shampall den stuth amh a thathar a 'cleachdadh ann an ath-fhreagairt tar-cheangail HA agus BDDE.
Nota: Tha iad sin uile air an tomhas aig an aon dùmhlachd agus co-mheas a chleachdar gus an ath-cheangal tar-cheangail a dhèanamh.Tha na h-àireamhan airson na stuthan amh a chaidh an sgrùdadh leis a’ chromatogram a’ freagairt ri: (1) uisge, (2) 2% fuasgladh uisgeach HA, (3) 1% fuasgladh uisgeach NaOH.Tha mion-sgrùdadh LC-MS air a dhèanamh airson tionndadh mòr de 203.30/129.10 Da (ann am modh adhartach MRM).
Giorrachaidhean: BDDE, ether diglycidyl 1,4-butanediol;HA, searbhag hyaluronic;LC-MS, cromatagrafaidheachd liùlach agus mòr-speactrometry;MRM, sgrùdadh ioma-fhreagairt.
Chaidh sgrùdadh a dhèanamh air na suidheachaidhean a lean gu cruthachadh stùcan ùra.Gus sgrùdadh a dhèanamh air mar a tha na suidheachaidhean freagairt a thathar a’ cleachdadh gus an hydrogel HA tar-cheangailte a thoirt gu buil a’ toirt buaidh air ath-ghnìomhachd an àidseant tar-cheangail BDDE, a’ leantainn gu cruthachadh stùcan ùra (seach-thoraidhean comasach), chaidh diofar thomhasan a dhèanamh.Anns na co-dhùnaidhean sin, rinn sinn sgrùdadh agus mion-sgrùdadh air an crosslinker BDDE mu dheireadh, a chaidh a làimhseachadh le diofar chruinneachaidhean de NaOH (0%, 1%, 0.1%, agus 0.01%) ann am meadhan uisgeach, air a leantainn le no às aonais autoclaving.Tha an dòigh-obrach bacteria gus na h-aon chumhachan a shamhlachadh an aon rud ris an dòigh a thathar a’ cleachdadh gus an hydrogel HA tar-cheangailte a thoirt gu buil.Mar a chaidh a mhìneachadh anns an roinn “Stuthan agus Dòighean”, chaidh gluasad mòr an t-sampall a sgrùdadh le LC-MS gu 203.30/129.10 Da.Tha an BDDE agus dùmhlachd na stùc ùr air an tomhas, agus tha na toraidhean air an sealltainn ann an Clàr 3. Cha deach stùcan ùra sam bith a lorg anns na sampallan nach deach fèin-chàradh, ge bith dè an làthaireachd a bha aig NaOH anns an fhuasgladh (sampaill 1-4, Clàr 3).Airson sampallan fèin-ghluasadach, chan eilear a’ lorg stùcan ùra ach ann an làthaireachd NaOH anns an fhuasgladh, agus tha coltas gu bheil cruthachadh an stùc an urra ri dùmhlachd NaOH anns an fhuasgladh (sampaill 5-8, Clàr 3) (RRT = 0.79).Tha Figear 5 a’ sealltainn eisimpleir de chromatogram ian, a’ sealltainn dà shampall fèin-chòmhdaichte an làthair no às aonais NAOH.
Giorrachaidhean: BDDE, ether diglycidyl 1,4-butanediol;LC-MS, cromatagrafaidheachd liùlach agus mòr-speactrometry;MRM, sgrùdadh ioma-fhreagairt.
Nota: Am prìomh chromatogram: Chaidh an sampall a làimhseachadh le fuasgladh uisgeach 0.1% NaOH agus fèin-chòmhdach (120 ° C airson 20 mionaid).Chromatogram aig a’ bhonn: Cha deach dèiligeadh ris an t-sampall le NaOH, ach chaidh fèin-chlasadh fo na h-aon chumhachan.Chaidh an tionndadh mòr de 203.30/129.10 Da (ann am modh adhartach MRM) a sgrùdadh le LC-MS.
Giorrachaidhean: BDDE, ether diglycidyl 1,4-butanediol;LC-MS, cromatagrafaidheachd liùlach agus mòr-speactrometry;MRM, sgrùdadh ioma-fhreagairt.
Anns a h-uile sampall autoclaved, le no às aonais NaOH, chaidh an dùmhlachd BDDE a lughdachadh gu mòr (suas ri amannan 16.6) (sampaill 5-8, Clàr 2).Dh’ fhaodadh an lùghdachadh ann an dùmhlachd BDDE a bhith mar thoradh air, aig teòthachd àrd, gum faod uisge a bhith na bhunait (nucleophile) gus fàinne epoxide BDDE fhosgladh gus todhar 1,2-diol a chruthachadh.Tha càileachd monoisotopic an t-saimeant seo eadar-dhealaichte bho chàileachd BDDE agus mar sin cha bhi buaidh air.Lorg LC-MS gluasad mòr de 203.30/129.10 Da.
Mu dheireadh, tha na deuchainnean sin a’ sealltainn gu bheil gineadh stùcan ùra an urra ri làthaireachd BDDE, NAOH, agus am pròiseas fèin-chlaidheamh, ach nach eil gnothach sam bith aige ri HA.
Bha an stùc ùr a chaidh a lorg aig àm gleidhidh timcheall air 2.71 mionaidean an uairsin air a chomharrachadh le LC-MS.Airson an adhbhair seo, chaidh BDDE (9.9 mg / mL) a thoirt a-steach ann am fuasgladh uisgeach 1% NaOH agus autoclaved.Ann an Clàr 4, tha feartan na stùc ùr air an coimeas ris an stùc iomraidh BDDE aithnichte (ùine gleidhidh timcheall air 3.47 mionaidean).Stèidhichte air mion-sgrùdadh ion-bhriseadh an dà stùc, faodar a cho-dhùnadh gu bheil an stùc le ùine gleidhidh de 2.72 mionaidean a’ sealltainn na h-aon mhìrean ris an stùc BDDE, ach le diofar dhian (Figear 6).Airson an ìre as àirde a fhreagras air an ùine gleidhidh (PIS) de 2.72 mionaidean, chaidh stùc nas dian fhaicinn às deidh sgaradh aig tomad de 147 Da.Aig dùmhlachd BDDE (9.9 mg / mL) a chaidh a chleachdadh anns a ’cho-dhùnadh seo, chaidh diofar mhodhan sùghaidh (UV, λ = 200 nm) anns an speactram ultraviolet fhaicinn cuideachd às deidh dealachadh cromatagrafach (Figear 7).Tha an stùc le ùine gleidhidh de 2.71 mionaidean fhathast ri fhaicinn aig 200 nm, fhad ‘s nach fhaicear an stùc BDDE anns a’ chromatogram fo na h-aon chumhachan.
Clàr 4 Toraidhean caractar an stùc ùr le ùine gleidhidh timcheall air 2.71 mionaidean agus an stùc BDDE le ùine gleidhidh de 3.47 mionaidean
Nota: Gus na toraidhean sin fhaighinn, chaidh mion-sgrùdaidhean LC-MS agus HPLC (MRM agus PIS) a dhèanamh air an dà mhullach.Airson mion-sgrùdadh HPLC, thathas a’ cleachdadh lorg UV le tonn-tonn de 200 nm.
Giorrachaidhean: BDDE, ether diglycidyl 1,4-butanediol;HPLC, cromatagrafaidheachd liùlach àrd-choileanadh;LC-MS, cromatagrafaidheachd liùlach agus mòr-speactrometry;MRM, sgrùdadh ioma-fhreagairt;m/z, co-mheas tomad-gu-charge;PIS, toradh Ion scan ;solas ultraviolet, solas ultraviolet.
Nota: Gheibhear na pìosan mòra le mion-sgrùdadh LC-MS (PIS).Cromatogram as àirde: speactram mòr de mhìrean sampall àbhaisteach BDDE.Chromatogram gu h-ìosal: Is e speactram mòr na stùc ùr a chaidh a lorg (RRT co-cheangailte ris an stùc BDDE 0.79).Chaidh BDDE a phròiseasadh ann am fuasgladh 1% NaOH agus fèin-chòmhdach.
Giorrachaidhean: BDDE, ether diglycidyl 1,4-butanediol;LC-MS, cromatagrafaidheachd liùlach agus mòr-speactrometry;MRM, sgrùdadh ioma-fhreagairt;PIS, scan ian toraidh;RRT, ùine gleidhidh càirdeach.
Figear 7 Ion chromatogram den ian ro-ruithear 203.30 Da, agus (A) an stùc ùr le ùine gleidhidh de 2.71 mionaid agus (B) lorg UV air stùc àbhaisteach iomraidh BDDE aig 3.46 mionaidean aig 200 nm.
Anns a h-uile hydrogels HA tar-cheangailte a chaidh a thoirt a-mach, chaidh fhaicinn gur e an dùmhlachd BDDE a bha air fhàgail às deidh tomhas LC-MS <2 ppm, ach nochd stùc ùr neo-aithnichte san anailis.Chan eil an stùc ùr seo a rèir toradh àbhaisteach BDDE.Tha toradh àbhaisteach BDDE cuideachd air a dhol tro an aon sgrùdadh càileachd (tionndadh MRM 203.30 / 129.10 Da) anns a’ mhodh adhartach MRM.San fharsaingeachd, thathas a’ cleachdadh dhòighean mion-sgrùdaidh eile leithid cromatagrafaidheachd mar dheuchainnean crìochnachaidh gus BDDE a lorg ann an hydrogels, ach tha a’ chrìoch lorgaidh as àirde (LOD) beagan nas ìsle na 2 ppm.Air an làimh eile, gu ruige seo, chaidh NMR agus MS a chleachdadh gus an ìre de thar-cheangal agus/no atharrachadh HA a chomharrachadh anns na pìosan aonad siùcair de thoraidhean HA tar-cheangailte.Cha b’ e adhbhar nan dòighean sin a-riamh a bhith a’ tomhas lorg BDDE fuigheall aig ìrean cho ìosal sa tha sinn a’ mìneachadh san artaigil seo (LOD den dòigh LC-MS againn = 10 ppb).
Ùine puist: Sultain-01-2021